操作指南

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骨髓染色体标本制备通常用于白血病患者,特别是急慢性粒细胞的白血病的检查,也适用于淋巴细胞性白血病。骨髓细胞处于生长分裂期,可以直接取样制备染色体标本片,为了增加细胞的分裂相数量,可在加入秋水仙素的培养液中作短暂的培养。再收集细胞制备染色体标本片,会获得较满意的分裂相数目。

1. 骨髓细胞短期培养法

    培养液配方:RPMI 1640       80%

                     小牛血清           20%

                      双抗                100单位/毫升

                      肝素                100单位

配好后分装成每瓶5毫升,冰冻保存,用灭菌的注射器从髓骨抽取骨髓液0.2-0.4毫升,直接注入预热37℃的培养液中摇匀,37℃培养24-48小时后,加入秋仙素(10微克/毫升)0.1毫升,继续培养4-6小时,终止培养收集细胞。

低渗、固定、制片等步骤与外周血染色体标本制备相同。

2. 骨髓细胞直接制片法

用灭菌的注射器从隋骨抽取骨髓液0.3-0.5毫升,立即注入含秋仙素0.1-0.05微克/毫升的生理盐水(5毫升)中,用滴管轻轻吸动,将骨髓的脂肪颗粒充分洗掉,平衡离心速度1000-1500/分,时间8-10分钟,弃上清。加入含同样秋水仙素浓度的生理盐水2-3毫升,37℃放置2-3小时,平衡离心,时间速度同上,弃上清。加低渗液5毫升,打匀后37℃水浴10-15分钟,离心弃上清,固定、制片的方法按外周血染色体标本制备进行。

3. 注意事项

1)骨髓染色体标片制备的成败,首先取决于骨髓液,抽取骨髓太少或太稀,细胞数量过少,不易获得较多的中期细胞,要进行核型分析就更困难了。故要足够的骨髓量和细胞数。细胞数量要求达3×106/毫升。通常作短期培养能增加细胞数目,提高成功率。

2)骨髓材料中脂肪颗粒较多,必须充分洗掉,否则影响标片的质量。




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