操作指南

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染色体显带技术常用的有荧光Q-带、Giemsa G-带、异染色质的C-带等。这里介绍较为常的Giensa G -C-带技术。

1. G-显带染色体标本的制备

方法一:

1)将配制好的0.25%的胰蛋白酶溶液60毫升倒入立式染色缸内,37℃水溶预热,用3% TrispH=7

2)将标本片浸入胰酶溶液中,不断轻轻摆动,新鲜标本只需处理3-9秒钟,老标本则需处理3-5分钟。

3)立即投入110120Giemsa工作液,染色15-20分钟

4)自来水冲净,气干。

方法二:

145毫升生理盐水或双蒸水倒入立式染色缸内,加入已配好的2%胰酶液5毫升,用3% Tris溶液调pH=737℃预热。

2)把染色体标本片浸入37℃上述胰酶工作液中,略加摇动,处理30秒左右。

3)取出后立即用110Giemsa工作液染色8-10分钟,自来水冲净。

注意事项

①胰酶的品质会直接影响显带的质量,购买品牌试剂较保险。

②胰酶的活性与pH值和温度有关,在pH=7温度37℃状态下,胰酶活性最高。

③胰酶处理时间长短与标本片片龄有关,新鲜的标本处理时间短,且带纹较清晰,建议标本片的片龄在2-7天内较适宜。

Giemsa工作液要现用现配

⑤胰酶工作液长时间置37℃水浴,容易浑浊污染,应弃之。

2. C-带染色体标本的制备

C显带特点:对染色体中的结构性异染色质容易染色,对常染色质只能显示较淡的轮廓。

C显带所显示着较深的结构部位:

①各染色体的着丝粒;

②各近端着丝粒的部位;

③在1916号染色体具有次缢痕的位置上;

Y染色体的长臂远端,此部分系Y染色质部分。其它部分着色很淡。

核型分析过程,对某些染色体变异问题,往往需要C显带技术与G显带技术结合分析,更能准确判断染色体、体的畸变。

方法一:

1)将常规制备染色体标本片放入0.2NHCL溶液中,室温下,处理15-30分钟;

2)自来水冲净后,再将标本片浸入预温到65℃的5% Ba(OH)2溶液中,处理10分钟;

3)自来水冲净后,再把标本片投入预温到65℃的2×SSC溶液中,处理1-1.5小时;

4)自来水冲净后,用110 Giemsa工作液染色0.5-1小时;

5)自来水冲净,气干。

方法二:

1)将制好的标本片放入0.2N HCL中,室温下1小时;

2)水洗净(均用自来水冲洗);

3)浸入1% Ba(OH)2水溶液中,温度预热到50℃,处理时间15-20秒;

4)水洗净

5)浸入预温到60℃的2×SSC溶液中,处理90分钟。

6)用水彻底冲净;

7110 Giemsa染色液染色10-15分钟

8)水冲净、气干。

注意事项

①标本片年龄不能超过一个月;

②各种处理溶液一定要达到所需的温度时,才放入表本片进行处理;

③每一步处理后,要立即用自来水彻底冲净后,才进行下一步处理。




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