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培养细胞中期染色体制备
作者: 发布于:2014/3/14 11:34:51 点击量:
1. 试剂的准备
(1) 10μg/ml 秋水仙素;
(2)0.075M 低渗液: 2.795 KCl + 500ml 蒸馏水
(3) 固定液 ——甲醇:冰醋酸=3:1(该试剂必需现配现用)
2. 实验方法
(1) 当细胞系的融合达到约75-90%时,于每5ml 的培养基细胞中加入25-50μl 秋水仙素,继续培养30min 至2 h(培养时间决定于细胞的生长速度及不同种细胞系间的差异);
(2) 按照常规的方法用胰蛋白酶进行细胞的消化;
(3) 将低渗液于37℃水浴中预热;
(4)低渗:加入10ml 0.075MKCl 溶液,用力吹打散开,吹打100 次,37℃水浴低渗15 分钟。
(5)预固定:加1.5ml固定液并用吸管轻轻吹匀,进行预固定10分钟。
(6)离心:2000rpm 离心5 分钟,弃上清液。
(7)固定I:沿管壁慢慢加入固定液6ml,用吸管吹打成细胞悬液后,37℃水浴20 分钟。
(8)离心:1000rpm 离心10 分钟,弃上清液。
(9)固定II:同固定I。
(10)离心同步骤9,离心去上清后,、加0.3-0.5ml 固定液,吸管吹打成细胞悬液。

(11)滴片:用吸管取细胞悬液,高度30-40 cm,滴在预冷的载玻片上,室温晾干,然后90℃烤箱烤片0.5 小时。




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